TaqMan®SNP基因分型技术利用Taq聚合酶的5'核酸酶活性在PCR期间产生荧光信号。对于每个SNP,该分析使用仅在SNP位点序列不同的两种探针,一种探针与野生型等位基因互补,另一种与变异等位基因互补。该技术利用FRET技术,将5'报告基因染料和3'淬灭染料共价连接至野生型和变异等位基因探针。当探针完好无损时,荧光会被抑制,因为淬灭染料位于报告染料的附近。在PCR退火步骤中,探针与目标SNP位点杂交。在PCR延伸过程中,由于Taq聚合酶的5'核酸酶活性,导致报告染料和猝灭染料被释放,从而导致报告染料的特征荧光增强。核酸外切酶活性仅在完全杂交的探针上发生,因为含有错配碱基的探针不会被Taq聚合酶识别。
在PCR反应结束时,将测量两种报告染料的荧光信号。信号的比率将指示样品的基因型(见图)。
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